В сертификате анализа пептида почти всегда встречаются две аббревиатуры: HPLC и LC-MS. Это разные методы, и каждый отвечает на свой вопрос о партии.
HPLC: сколько в образце целевого вещества
HPLC — высокоэффективная жидкостная хроматография. Раствор образца под высоким давлением прокачивают через колонку с сорбентом. Разные вещества удерживаются в ней по-разному и выходят в разное время. Детектор строит хроматограмму — график с пиками, где каждый пик соответствует одному веществу. По доле площади главного пика определяют чистоту партии.
LC-MS: то ли это вещество
LC-MS объединяет хроматографию с масс-спектрометрией. После разделения на колонке молекулы ионизируют и измеряют их массу. Если найденная масса совпадает с расчётной для нужной последовательности, подлинность вещества подтверждена. Метод также помогает понять, что за примеси видны на хроматограмме.
Зачем нужны оба метода
Методы дополняют друг друга:
- HPLC показывает, насколько чист образец, но не доказывает, что главный пик — нужный пептид;
- LC-MS подтверждает подлинность, но хуже подходит для точного расчёта процента чистоты;
- вместе они дают картину, по которой партию можно выпустить или отклонить.
Поэтому в хорошем сертификате указаны результаты обоих испытаний, их условия и номер партии, к которой они относятся.
